En tant que doctorant en Ann Marie CraigDans le laboratoire de l’Université de l’Illinois, Urbana-Champaign, j’ai étudié ce qui dirigeait deux récepteurs du glutamate à leurs positions pour les fonctions dans les neurones hippocampiques. Soupçonnant que l’extrémité cytosolique de la protéine pourrait être responsable, j’ai échangé les queues C-terminales de ces protéines pour créer chimèresPour faciliter la détection des deux chimères et des deux protéines originales dans mes différentes cultures cellulaires, j’ai inséré une séquence pour une étiquette de trois acides aminés dans le N-terminus de toutes mes protéines que je pouvais détecter avec un anticorps.
Julia Darby, aujourd’hui professeure particulière dans les districts scolaires de l’Iowa et de l’Illinois, était étudiante diplômée en récepteurs du glutamate à l’Université de l’Illinois, à Urbana-Champaign. Elle a appris après avoir soutenu sa thèse que certaines de ses méthodes n’avaient peut-être pas fonctionné comme elle le pensait.
Julia Darby
Lorsque j’ai exprimé les différentes constructions protéiques dans des cellules neuronales en culture, j’ai démontré que ces queues C-terminales déterminaient la localisation des récepteurs du glutamate. J’ai également obtenu de belles images illustrant qu’un récepteur se trouvait dans les axones et que le second était localisé le long de l’axone et dans les dendrites, et elles étaient si étonnantes que Neurone nous les avons sélectionnés pour la couverture du numéro lorsque nous avons publié les données.
J’ai soutenu ma thèse avec cette histoire de réussite et je suis allé à l’Université de Washington à Saint-Louis pour poursuivre un poste postdoctoral. Environ un an plus tard, un chercheur postdoctoral du laboratoire de Craig a suivi mon projet pour étudier les récepteurs natifs. Leurs données ont montré que mon récepteur qui apparaissait de manière homogène le long de l’axone se regroupait en fait à ses emplacements sur l’axone et la synapse. Il s’est avéré que mon marqueur introduit interrompait cette activité, de sorte que les protéines n’interagissaient pas entre elles comme elles auraient dû le faire.
Lorsque j’ai appris cette différence, ma première pensée a été de me réjouir d’avoir déjà terminé mon doctorat. Nous n’avons pas retiré l’article, car même si la disposition que nous avions observée était erronée, nos conclusions concernant le rôle du C-terminus étaient correctes.
Cet incident me rappelle qu’en science, nous posons beaucoup de questions, mais la manière dont nous y répondons est souvent plus importante que les résultats eux-mêmes.
Cette interview a été éditée pour des raisons de longueur et de clarté.
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