Infographie : Le Phage Display permet le criblage rapide de millions de peptides

GÉNÉRATION DE BIBLIOTHÈQUES DE PHAGE DISPLAY

Les scientifiques insèrent des séquences d’ADN variables codant pour leurs protéines d’intérêt dans des plasmides qui portent un gène de protéine d’enveloppe de phage, un gène de résistance aux antibiotiques et un signal d’empaquetage. Ils transforment ensuite les plasmides en vecteur bactérien et l’infectent avec un phage auxiliaire qui fournit les autres protéines virales nécessaires. Cela génère la bibliothèque de phages, où chaque virion exprime des versions de la protéine d’intérêt sur sa protéine d’enveloppe et porte sa séquence génétique dans son génome.

PURIFICATION PAR AFFINITÉ

Dans l’étape suivante, les chercheurs isolent les phages exprimant les protéines de surface à l’aide d’un test de liaison de ligand de surface. Les phages élués finaux peuvent porter un mélange de différents épitopes de protéines de surface.

AMPLIFICATION DES PHAGES

Au cours de l’étape d’amplification, les chercheurs propagent les phages élués dans une culture bactérienne et peuvent effectuer des cycles supplémentaires de purification par affinité.

ISOLEMENT DES CLONES

Les chercheurs infectent les bactéries avec les phages sélectionnés et les cultivent sur des plaques contenant des antibiotiques. Dans la dernière étape, ils sélectionnent des colonies résistantes pour isoler les plasmides, qui sont ensuite séquencés et clonés dans les vecteurs de production de protéines souhaités pour diverses applications.

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